Среды для хранения чистых культур

Основная цель, преследуемая при оптимизации состава сред, используемых для хранения,- максимально замедлить процесс метаболизма, а следовательно, и роста культуры. При этом влажность среды должна быть такова, чтобы в течение года не делать пересевов из-за ее пересыхания.

Чистые культуры хранятся в пробирках на агаризованных питательных средах. Агар-агар - это полисахарид, полученный из определенных сортов морских водорослей. Он не является питательным веществом и служит только для уплотнения среды. В воде агар-агар плавится при температуре 80-100°С, застывает при 40-45°С. Приведем несколько рецептов питательных сред:

картофельно-глюкозный агар (г/л):
1. очищенные и измельченные клубни картофеля - 200 г
2. глюкоза-10г
3. агар-агар -15-20 г (или агароид 35-40г)
4. вода - 1 л

Сусло-агар
1. неохмеленное пивное сусло - 250 мл (0,25 л)
2. агар-агар -15-20 г
3. вода - до 1 л

 

Пивное сусло можно заменить зерновым отваром.
 

Для приготовления картофельно-глюкозной среды клубни картофеля отваривают до готовности, отвар фильтруют, объем фильтрата доводят до 1 л. Добавляют глюкозу, агар-агар. Среду нагревают до полного расплавления агар-агара. Для приготовления сусло-агаровой среды рН сусла должно быть в пределах 4-4,5.

Мицелии вешенки обыкновенной, шампиньона двуспорового хорошо хранятся в среде, где вместо сусла используется зерновой отвар, содержащий все необходимые для роста культуры компоненты.
 

Приготовленные среды разливают в пробирки (20x200 мм) по 10 мл. Пробирки закрывают ватно-марлевыми пробками. Пробка должна входить в горлышко пробирки на две трети своей длины, не слишком туго, но и не свободно. При разливе необходимо следить, чтобы среда не смочила края пробирки, иначе к ним могут прилипнуть пробки. В чашки Петри наливают по 15 мл среды, равномерно распределяя ее по дну чашки.
 

Приготовленные среды готовы для стерилизации. Стерилизуют пробирки со средой при давлении 1,5 атм. в автоклаве в течение 1 часа. После этого пробирки с расплавленной агаровой средой достают из автоклава и укладывают в наклонном положении с таким расчетом, чтобы среда не заходила за 2/3 высоты пробирки, иначе она может смочить пробку, что недопустимо. Когда среда застынет, пробирки ставят вертикально и дают стечь воде- конденсату (чашки Петри для этого устанавливают вверх дном).
 

Стерилизованные среды помещают в термостат при 28°С на несколько дней. Если на поверхности и в толще среды не будет отмечен рост бактерий или колоний плесневых грибов, среды считают стерильными и передают для посева культур.